AAT Bioquest活性氧 Cell Meter 细胞内荧光法检测试剂盒 荧光货号11503

Cell Meter 细胞内荧光法检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化物的试剂盒， (H2O2) 是一种活性氧代谢副产物，是许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它参与了许多、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、骨质疏松症、许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物事件。也许生物学有趣的方面是近的报告，即抗体具有将分子氧转化为的能力，有助于系统的正常识别和破坏过程。这种活性物质的测量将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。该 Cell Meter 检测试剂盒使用我们特的 OxiVision Green 探针来量化活细胞中的。 OxiVision Green 具有细胞渗透性，当它与反应时会产生荧光。该试剂盒是一种优化的“混合和读取”分析格式，与 HTS 液体处理仪器兼容。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的Cell Meter 细胞内荧光法检测试剂盒。  

AAT Bioquest活性氧 Cell Meter 细胞内荧光法检测试剂盒 荧光货号11503适用仪器

96孔板的测定方案

概述

用于溶液测定

1.准备H2O2反应混合物（50μL）

2.加入H2O2标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10-60分钟

4.在Ex / Em = 490/525 nm （cutoff=515nm）处检测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

用于活细胞检测

1. 在生长培养基中制备细胞
2. 使用 OxiVision Green 探针工作溶液对细胞进行染色并孵育
3. 用测试化合物处理细胞
4. 在 Ex/Em = 490/525 nm (Cutoff = 515nm) 处用底部读取模式检测荧光强度

溶液配制

1. OxiVision Green 探针储备液 (250X)
将 50 μL DMSO（组分 D）加入 OxiVision Green 探针（组分 A）的小瓶中，制成 250X OxiVision Green 探针储备液，注意避光。

2. H2O2 标准溶液（20 mM）
将 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，组分 B）加入 977 μL 的 Assay Buffer（组分 C）中，制成 20 mM H2O2 标准溶液。

注意 稀释的 H2O2 标准溶液不稳定。 未使用的部分应丢弃。

3.H2O2 标准
将 50 μL 20 mM H2O2 标准溶液加入 950 μL Assay Buffer（组分 C）中，得到 1000 μM H2O2 标准溶液。 取 1000 μM H2O2 标准溶液并进行 1:3 的系列稀释，以得到含有测定缓冲液（组分 C）的系列稀释的 H2O2 标准品（HS1 - HS7）。

4.工作溶液配制

将 20 μL 250X OxiVision Green 探针储备液加入 5 mL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 OxiVision Green 探针工作溶液。

AAT Bioquest活性氧 Cell Meter 细胞内荧光法检测试剂盒 荧光货号11503操作步骤

在上清液反应中检测H2O2
表 1. 纯黑色 96 孔微孔板中 H2O2 标准品和测试样品的布局。 HS= H 2 O 2 标准品（HS1 - HS7，300 至 0.3 μM）； BL=空白控制； TS=测试样品

表2. 每孔试剂组成

1.根据表 1 和表 2 中提供的布局准备 H2O2 标准 (HS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂，而不是 50 μL。

2. 将 50 μL OxiVision Green 探针工作液加入 H2O2 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，使H2O2 测定总体积为 100 μL/孔。 对于384孔板，将 25 μL 的 OxiVision Green 探针工作溶液添加到每个孔中，总体积为 50 μL/孔。

3. 在室温下将反应孵育 15 到 30 分钟，避光。

4. 用荧光酶标仪在Ex= 490 ± 10，Em= 520 ± 10 nm（佳 Ex/Em = 490/525 nm，截止 = 515 nm）检测荧光强度。

在活细胞中进行H2O2检测

1.根据需要培养细胞

2.用 PBS 缓冲液清洗细胞，用 100 μL/孔的 OxiVision Green 探针工作溶液孵育细胞 5 到 60 分钟。 对于 384 孔板，添加 25 μL/孔的 OxiVision Green 探针工作溶液。

3. 在 Ex/Em = 490/525 nm (Cutoff = 515 nm) 下使用荧光酶标仪（底部读取模式）检测荧光增加或使用 FITC 通道通过荧光显微镜成像荧光变化。

AAT Bioquest活性氧 Cell Meter 细胞内荧光法检测试剂盒 荧光货号11503参考文献

Bio-inspired redox-cycling antimicrobial film for sustained generation of reactive oxygen species
Authors: Huan Liu, Xue Qu, Eunkyoung Kim, Miao Lei, Kai Dai, Xiaoli Tan, Miao Xu, Jinyang Li, Yangping Liu, Xiaowen Shi
Journal: Biomaterials (2018)

PPARα-mediated peroxisome induction compensates PPARγ-deficiency in bronchiolar club cells
Authors: Srikanth Karnati, Gani Oruqaj, Harshavardhan Janga, Srinu Tumpara, Claudia Colasante, Paul P Van Veldhoven, Nancy Braverman, Adrian Pilatz, Thomas J Mariani, Eveline Baumgart-Vogt
Journal: PloS one (2018): e0203466

Semaphorin 4D inhibits neutrophil activation and is involved in the pathogenesis of neutrophil-mediated autoimmune vasculitis
Authors: Masayuki Nishide, Satoshi Nojima, Daisuke Ito, Hyota Takamatsu, Shohei Koyama, Sujin Kang, Tetsuya Kimura, Keiko Morimoto, Takashi Hosokawa, Yoshitomo Hayama
Journal: Annals of the Rheumatic Diseases (2017): annrheumdis--2016

Aggravation of brain infarction through an increase in acrolein production and a decrease in glutathione with aging
Authors: Takeshi Uemura, Kenta Watanabe, Misaki Ishibashi, Ryotaro Saiki, Kyoshiro Kuni, Kazuhiro Nishimura, Toshihiko Toida, Keiko Kashiwagi, Kazuei Igarashi
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2016): 630--635

detection with high specificity in living cells and inflamed tissues
Authors: Lei Rong, Chi Zhang, Qi Lei, Ming-Ming Hu, Jun Feng, Hong-Bing Shu, Yi Liu, Xian-Zheng Zhang
Journal: Regenerative Biomaterials (2016): rbw022

Modification of lignin in sugarcane bagasse by a monocopper hydrogen peroxide-generating oxidase from Thermobifida fusca
Authors: Cheng-Yu Chen, Cheng-Cheng Lee, Hung-Shuan Chen, Chao-Hsun Yang, Shu-Ping Wang, Jyh-Horng Wu, Menghsiao Meng
Journal: Process Biochemistry (2016): 1486--1495

Dopamine-mediated oxidation of methionine 127 in α-synuclein causes cytotoxicity and oligomerization of α-synuclein
Authors: Kazuhiro Nakaso, Naoko Tajima, Satoru Ito, Mari Teraoka, Atsushi Yamashita, Yosuke Horikoshi, Daisuke Kikuchi, Shinsuke Mochida, Kenji Nakashima, Tatsuya Matsura
Journal: PLoS One (2013): e55068

stimulates the epithelial sodium channel through a phosphatidylinositide 3-kinase-dependent pathway
Authors: He-Ping Ma
Journal: Journal of Biological Chemistry (2011): 32444--32453