百萤问号之活性氧ROS Brite 570适用仪器有哪些

1.活性氧ROS Brite 570概述

活性氧(ROS)是以化学方法反应的包含活性氧原子的化合物。例如：氧化物、含有羟基自由基、单线态氧和过氧化物的衍生物。 ROS具有很高的活性，因为存在未配对的价电子层单电子。 ROS是生物氧代谢自然形成的副产物，它在细胞信号传递和体内平衡方面扮演着重要角色。然而在一些环境情况下（如紫外线照射或者高温环境下），ROS水平将大幅度增加。这可能导致细胞结构的重大伤害，日积月累,这被称为氧化应激。外部来源也生成ROS ，如电磁辐射。在氧化应激条件下，活性氧产量大幅度增加， 导致细胞膜脂、蛋白质和核酸的逐渐破坏。这些生物分子的氧化性损伤是与衰老和各种疾病紧密相关，例如动脉粥样硬化、致癌性、缺血性、神经衰退性疾病。 ROS Brite 570试剂是用以测量细胞内氧化应激水平的新型荧光分子探针，可以被常用的荧光显微镜高分辨率、微型板块荧光测量 或者流式细胞仪成像。细胞渗透性  ROS Brite 570试剂是没有荧光的，在与活性氧反应产生明亮的近红外荧光 。因此该试剂可以用常用的荧光显微镜高分辨率、微型板块荧光测量 或者流式细胞仪成像通过测量荧光信号来测量细胞内氧化应激水平。

图1.ROS Brite 570 对 PBS 缓冲液（pH 7.2）中不同活性氧物质的荧光响应。荧光强度用 Ex/Em = 540/590 nm 测量

2.活性氧ROS Brite 570适用仪器

荧光显微镜

Ex:   Cy3/TRITC滤波片组

Em:   Cy3/TRITC滤波片组

孔板:  黑色透明底板

滤波片组:  Cy3/TRITC滤波片组

3.活性氧ROS Brite 570实验方案

样品操作及实验分析

1）在DMSO中准备10至20 mM ROS Brite 储备溶液。 通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）将DMSO储备溶液稀释到Hanks溶液中，制成5至10 µM的工作溶液。

2）根据需要处理细胞（例如，使用50-100 nM血管紧张素II处理RASM细胞3-5小时）。

3）将细胞与ROS Brite （5-10 µM，来自步骤＃1）在37ºC下孵育15 -30分钟。

注意：所使用的ROS Brite 的浓度随细胞系的不同而不同，需要测试不同的浓度才能获得佳剂量。 对于cat＃16053，可能使用的浓度较低，例如0.5-5 uM。

4）用HHBS缓冲液代替染料加载溶液。

5）用适当的荧光仪器（例如荧光显微镜，流式细胞仪或体内成像仪器）分析细胞。